01- siRNA储存

常规化学合成的siRNA序列为21～23nt的双链小分子RNA，为冻干粉形式的即用型试剂 ，在常温不溶解的情况下可以保存至少1个月时间，放置于-20℃～-80℃低温环境中，冻干粉可以稳定保存一年。

02- 转染试剂储存

4℃保存，不可冷冻。

03-体外转染操作流程：

第一步、接种细胞：建议提前一天接种细胞，接种数量参考下方推荐量。

第二步、 转染复合液配制：

● siRNA稀释液配制：siRNA以水稀释至140 μg/mL。

● siRNA转染复合液配制：取无菌离心管，加入2μL siRNA稀释液，加入LipidnanoTM Super RNAi转染试剂A液14μL，吹打混匀，加入LipidnanoTM Super RNAi转染试剂B液4μL，混合均匀，室温放置5min，加培养液180μL，吹打混匀。

第三步、细胞加样：按下方推荐量将配制好的siRNA转染复合液加入各细胞孔中，摇动培养板，轻轻混匀。

第四步、细胞培养：37 ℃，5% CO2 培养箱培养，直至发挥干扰作用。建议24~48h测定mRNA水平、48~72h测定蛋白水平。

操作流程示例

siRNA样品加入示例

示例中使用的体外转染试剂为同立海源生产的LipidnanoTM Super RNAi转染试剂，主要应用于：贴壁细胞和悬浮细胞转染，部分原代细胞和转化细胞株的基因转染，siRNA高通量转染试验。在进行体外转染实验的过程中，实验还需注意这些细节：

❶ 转染前，确保siRNA是经过PAGE纯化和脱盐处理过的，高纯度的siRNA或者miRNA有助于获得较高的转染效率，并确保 siRNA/miRNA 基因沉默表达不会影响细胞活力。

❷ 首次转染：如果您是首次转染您的细胞系，推荐尝试使用几个siRNA转染试剂复合液浓度，并在0.014μg/mL~0.70μg/mL范围内改变siRNA的浓度，根据首次转染结果调整剂量水平。

❸ siRNA转染试剂稀释液的选择：对培养基无特殊要求，可使用完全培养基进行稀释，不强要求减/无血清培养基。

❹ 浓度换算：摩尔浓度与质量浓度之间的换算关系可根据siRNA分子量可进行同步换算。X nmol/L*分子量=Y ng/L，如分子量为14000的siRNA，1nmol/L*14000=14000ng/L=14μg/L。

❺ 转染细胞密度：推荐在70％左右时进行转染。通常基因沉默的分析要在转染后24小时进行。本转染试剂极低的细胞毒性可以方便研究者根据目的细胞生长特性，靶基因的表达特性，选择适合条件进行转染。健康的细胞培养物和严格的操作确保转染的重复性。通常健康的细胞转染效率较高，较低的传代数能确保每次实验所用细胞的稳定性。推荐用50代以下的细胞转染。 

❻ 阳性对照选择：通过合适的阳性对照、实验siRNA优化转染和检测条件，对大多数细胞，GADPH-siRNA是较好的阳性对照。将不同浓度的阳性对照