细胞污染全攻略（含防、治妙招）

我擦……

细胞又污染了！

咋整，快崩溃了！！

Who can help me! ！！                         

君莫急，小翊来帮您！

专治各种细胞疑难杂症，

小翊送你完整攻略。

攻略一：了解细胞污染 

古人云：知己知彼方可百战百胜，因此了解细胞污染是非常重要的。常见的污染类型有细菌污染、真菌污染、支原体污染、原虫污染、黑胶虫污染、病毒污染以及非同种细胞污染。

      1、细菌：细菌在普通倒置显微镜高倍镜下大多可见，根据感染细菌种类不同，呈现不同的外形。其培养基一般会变浑浊、变黄较快，对细胞生长状态影响明显。

图1：细胞受到细菌污染图

        2、真菌：真菌污染在显微镜下可以看到丝状物，有些真菌开始很像死细胞碎片，呈珊瑚状，随时间转移会长出黑色丝状物。真菌生长的比较慢，一般培养基清亮，不变色，不如细菌易被发现，一旦发现有它的存在，细胞污染就比较严重了，也很难救活。

图2：细胞受到真菌污染图

         3、支原体：细菌和真菌造成的污染相对容易发现，然而支原体造成的污染很难察觉，即使生长密度高达 10⁷-10⁹CFU/ml，也很难有污染迹象（浑浊、pH变化等）。支原体污染后导致细胞生长变慢，状态变差，不会马上使细胞致死，但会影响细胞内的各种参数，如改变细胞新陈代谢，改变DNA转染效率。支原体感染细胞以后，细胞病变不明显，只是慢慢死去。

图3：细胞受到支原体污染图

         4、黑胶虫*：一般低倍镜下观察呈黑色点状，高倍镜下可看见黑色物蠕动，培养液不易变浑浊，在细胞增殖旺盛之后会减少或消失。有时也会出现观测到的运动物明显增多，细胞状态变差，最终死亡。（*对于黑胶虫没有明确的定论，通常认为黑色物是由于多种原因导致细胞状态变差、死亡细胞产生的碎片）

图4：细胞受到黑胶虫污染图

      5、原虫*：该污染在显微镜下易观察到，轻微活动，细胞能生长但繁殖速度明显减慢，培养基产生浑浊，细胞状态差，边缘不清楚，细胞不透亮。其能与细胞共生并争夺培养基营养，当到达一定的数量时就会影响到细胞的生长，导致细胞死亡。（*对于原虫污染倾向于是细菌类污染）

图5：细胞受到原虫污染图

      6、病毒：由于病毒过小导致培养过程中难以观察。由于在获得原代细胞过程中没有完全除去潜在的病毒，导致病毒污染。尽管病毒污染对细胞原代培养不会造成太大影响，但对下游工业生产如生产疫苗等造成安全隐患，因此需要尽量去除。

 图6：病毒入侵猴肝脏细胞层图像（图 源自悉尼大学）

       7、非同种细胞污染 ：这个主要指不同种类细胞产生的交叉污染，由于细胞培养过程中不同种类细胞株所需器材和溶液没有严格分开，导致细胞交叉污染。据报道，世界上已有多种细胞都被HeLa细胞所污染，致使许多实验宣告无效，因此避免非同种细胞污染也需要引起实验者的重视。

图7：细胞受到非同种细胞污染图

攻略二：污染的去除

细胞培养过程中难免会遇到细胞污染，怎么办？？？

 多数污染是较难完全去除，如果污染的细胞非珍贵且有备用，宜舍弃;

 找到污染源后并清除掉，可复苏冻存细胞或重新购置细胞培养；

 若污染细胞很珍贵，一时难觅新，针对不同污染小翊给您如下建议。

攻略三：污染的预防

　　细胞污染是比较难处理，因此预防就显的尤为重要。对于预防可从以下几方面着手：

1、 使用抗生素：对细胞培养基使用双抗（在细胞培养基中推荐青霉素的工作浓度为100U/ml，链霉素为0.1mg/ml。）

2、 支原体预防：可以使用支原体预防试剂预防支原体的污染产生。

3、培养器材、用品需消毒灭菌：细胞培养所用器材要清洗消毒，各种溶液灭菌处理。

4、实验操作者的无菌意识

　　①洗手消毒，穿隔离衣。工作开始时要用酒精棉球擦手并对器皿进行酒精擦拭；

　　②操作需在生物安全柜内并佩戴口罩；

　　③尽量使用一次性无菌器材操作，对于多次使用的需实高压灭菌处理。实验完毕用酒精擦拭操作台面。

5、细胞交叉污染的预防

　　①一次对多种细胞培养操作时，所用器具要严格区分；

　　②在进行换液或传代操作时尽量避免液体溅出污染其他细胞；