CD分子，即白细胞分化抗原，也称分化簇（Cluster of Differentiation），广泛分布于各种免疫细胞表面，如B细胞、T细胞、树突状细胞和NK细胞等，是不同谱系的白细胞在正常分化成熟的不同阶段及活化过程中，出现或消失的细胞表面标记。监测不同CD抗原的表达谱使得基于细胞在不同免疫过程中的功能的细胞类型鉴定、分离和表型分型成为可能。

表1.免疫分型的重要CD标志物

常见CD分子生物学功能

CD3

是一种20-26 kDa的分子，表达于所有成熟的T淋巴细胞（约占正常人外周血淋巴细胞的60-80%）、NK-T细胞和一些胸腺细胞。CD3与T细胞受体α/β或γ/δ二聚体相关联，还在抗原识别过程中参与T细胞的激活和信号转导。CD3单抗被用于测定血液中成熟T细胞。

CD4

也称为T4，是一种55kD的单链跨膜糖蛋白，属于免疫球蛋白超家族。CD4存在于大多数胸腺细胞、T细胞的一个亚群、也低水平表达于单核/巨噬细胞。CD4是免疫应答中的共受体（通过与MHC II类分子结合发挥协同受体活性），同时也是HIV感染的主要受体（CD4是HIV-1表面糖蛋白gp120的主要受体）。CD4调节T细胞的活化、参与T/B细胞的粘附、T细胞的分化、T细胞选择和信号转导。

CD8a

是一种32-34kD的I型糖蛋白。它与CD8b形成同源二聚体（CD8a/a）或异源二聚体（CD8a/b）。CD8，也称为T8和Leu2，是免疫球蛋白超家族的成员，存在于大多数胸腺细胞、外周血T细胞的一个亚群以及NK细胞上（几乎完全表达CD8a同源二聚体）。CD8作为MHC I的共受体在抗原识别和T细胞活化中发挥作用，并在胸腺分化中扮演了重要角色。CD8a中的两个结构域对其功能非常重要：胞外结合MHC Iα3的IgSF结构域和胞内酪氨酸激酶p56 Lck的CXCP结构域。

CD28

是一种44 kD的二硫键连接的同源二聚体型I糖蛋白。它是免疫球蛋白超家族的成员，也被称为T44或Tp44。CD28 在大多数T系细胞、NK细胞亚群和浆细胞上表达。CD28采用CDR3样环中高度保守的MYPPY结构同时结合CD80 和CD86。CD28被认为是一个主要的共刺激分子，诱导T淋巴细胞的激活和IL-2合成，并防止细胞死亡。体外研究表明，CD28为抗原呈递细胞的CD80和CD86上的配位提供了T细胞激活和增殖所需的共刺激信号。

CD19

是一种 95 kD 的 I 型跨膜糖蛋白，也被称为 B4。它是免疫球蛋白超家族的成员，在 B 细胞（从前 B 细胞到成熟 B 细胞，但在浆细胞上不存在）和滤泡树突状细胞上表达。CD19 参与 B 细胞的发育、激活和分化。CD19 与 CD21（CR2）和 CD81（TAPA-1）形成复合物，并作为 BCR 共受体发挥作用。

CD20

是一种 33-37 kD 的膜蛋白，有四个跨膜区段，也被称为 B1 和 Bp35。CD20 在前 B 细胞、静止和活化的 B 细胞（不包括浆细胞）、一些滤泡树突状细胞以及 T 细胞亚群中低水平表达。CD20 在活化的 B 细胞和恶性 B 细胞中被大量磷酸化。CD20 的同源寡聚体复合物被认为形成 B 细胞质膜的 Ca2+导电离子通道。CD20 分子参与 B 细胞的激活，并与各种 Src 家族激酶（Lyn、Lck、Fyn）相关。它与 MHC I 和 II 类、CD53、CD81 和 CD82 形成复合物。 

CD抗原在免疫分型中被广泛用作细胞标志物，可用于识别特定白细胞群和淋巴细胞亚群的存在和比例，并对其进行分离。流式细胞术和免疫组织化学（IHC）是检测和分析这些CD标志物的常用检测方法。

流式抗体选择注意事项

 01

抗体的基础信息

待测靶标表达位置：胞膜表达或胞内表达，靶标表达位置不同，染色方式也不同

抗体反应性需与样品来源一致；

选择明确标注可用于流式实验的抗体；

02

确定流式细胞仪的参数

激光器：提前了解使用的流式细胞仪的激光器配置，常见的有紫色激光(405nm)、蓝色激光(488nm)、红色激光(635nm)等；

滤光片：检测通道的多少，决定最多可以同时检测几个指标。荧光素的发射波长与滤光片有关，所选择荧光素要在仪器的可检测范围内。

03

荧光素的选择

抗原表达弱或分群不明显，选择强荧光，如PE、APC；

抗原表达强或分群明显，选择弱荧光，如FITC；

常用荧光强弱排序：PE-Cy5＞PE＞AF647＞APC＞PerCP＞Cy5.5＞FITC。

04

同型对照抗体的选择

选择与一抗相同种属来源，相同免疫球蛋白亚型，相同荧光染料标记的同型对照抗体。如32102ES-FITC Mouse Anti-Human CD3 mAb(IgG2a), 同型对照选择FITC Mouse IgG2a。

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