钙离子荧光探针Fluo-3, AM是美国AAT生产的用于钙通量测定的试剂，钙通量测定是用于筛选G蛋白偶联受体（GPCR）的药物发现中的优选方法。 我们的Quest Fluo-8 和Rhod-4 系列钙检测试剂是亮的绿色和红色钙指示剂。 我们的其他钙指标如Fluo-3，Fura-2，Indo-1，Rhod-5N和Rhod-2 AM也具有与市场上相比高的质量。百萤生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供优质的钙离子荧光探针。

实验方案

储备溶液配制

（除非另有说明，所有未使用的储备液应分装成单次使用量，配制后于-20°C保存，避免反复冻融）

Fluo-3 AM储备液

使用高质量无水DMSO配制2~5 mM的Fluo-3 AM储备液。

工作溶液配制

Fluo-3 AM工作溶液

1.实验当天，将Fluo-3AM溶解于DMSO或 解冻储备液至室温

2.选用合适的缓冲液（如Hanks和Hepes缓冲液），加入0.04% Pluronic® F-127，配制2~20 μM的Fluo-3 AM工作液。对于多数细胞系，推荐终浓度为4~5 μM，具体浓度需根据细胞类型优化确定

注：1.Pluronic® F-127（非离子洗涤剂）可增强Fluo-3 AM的水溶性，其多种规格溶液可从百萤生物购买。

       2.若细胞表达有机阴离子转运体，建议在工作液中加入1~2 mM丙磺舒（probenecid，孔内终浓度0.5~1 mM），以减少水解后探针的外漏。AAT Bioquest提供多种即用型ReadiUse™丙磺舒产品，包括水溶性制剂、钠盐及稳定化溶液等可选规格。可从百萤生物直接购买。

实验操作流程

以下为活细胞AM酯染色推荐步骤，本方案仅提供指南，请根据实际需求调整

1.在生长培养基中培养细胞过夜。

2.次日向细胞板中加入1× Fluo-3 AM工作液。

注意：若待测化合物与血清存在干扰，在染色前需更换为新鲜HHBS缓冲液。

3.将加入染料的孔板在37°C的细胞培养箱中培养30至60分钟。

注意：某些细胞系延长孵育时间（>2小时）可增强信号强度。

4.移除工作液，更换为HHBS或含阴离子转运抑制剂（如1 mM丙磺舒）的缓冲液，以去除多余探针。

5.加入刺激剂后，立即使用配备FITC滤光片的荧光显微镜 或 集成程序化液体处理系统的荧光酶标仪（如FDSS、FLIPR或FlexStation）在490/525nm，Cutoff=515nm处检测荧光强度